劲帆医药已建立并完善了涵盖AAV(详见AAV检测分析服务)和蛋白产品鉴别、结构分析、含量、纯度、杂质、安全性和一般理化特性等维度的一系列的分析方法,并成功用于多个CRO以及CDMO项目的工艺开发以及放行检测,以稳健可靠的分析方法为产品质量保驾护航。
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检测项目 |
检测方法 |
方法描述 |
送检要求 |
检测周期 (工作日) |
交付物 |
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蛋白质特异性 |
WB |
N/A |
提供靶点信息,蛋白浓度,单次蛋白总量≥4μg,体积≥15μL |
7 (抗体采购到位后) |
检测报告 |
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蛋白质大小特异性 |
SDS-PAGE |
考马斯亮蓝染色 |
提供蛋白浓度,单次蛋白总量≥4μg,体积≥15μL |
7 |
检测报告 |
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检测项目 |
检测方法 |
方法描述 |
送检要求 |
检测周期 (工作日) |
交付物 |
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分子量 |
LC-MS |
完整、还原、切糖分子量 |
≥50μg |
7 |
检测报告 |
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肽图覆盖率(PM) |
LC-MS |
多种酶切,基于已知氨基酸序列进行匹配,计算覆盖率 |
≥200μg |
15 |
检测报告 |
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SDS-PAGE切胶回收,胶内酶解肽图覆盖率 |
LC-MS |
跑胶、切胶回收目标条带,胶内酶解、回收肽段,基于已知氨基酸序列进行匹配,计算覆盖率 |
≥300μg |
20 |
检测报告 |
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N/C端序列 |
LC-MS |
酶切,基于已知氨基酸序列进行匹配 |
≥300μg |
7 |
检测报告 |
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N端序列 |
Edman 降解法 |
N末端氨基酸残基被异硫氰酸苯酯修饰,然后从多肽链上切下修饰的残基,再经层析鉴定,余下的多肽链(少了一个残基)被回收再进行下一轮降解循环。 |
≥200μg |
10 |
检测报告 |
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翻译后修饰(PTM) |
LC-MS |
可定量分析脱酰胺、糖基化、氧化、Lys缺失、环化等多种修饰类型 |
≥200μg |
15 |
检测报告 |
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糖基化位点 |
LC-MS |
比对切糖前后肽段分子量,确定糖基化位点 |
≥200μg |
10 |
检测报告 |
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二硫键分析 |
LC-MS |
比对还原和非还原肽段分子量,确定二硫键配对情况及单一位点错配率 |
≥200μg |
20 |
检测报告 |
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检测项目 |
检测方法 |
方法描述 |
送检要求 |
检测周期(工作日) |
交付物 |
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总蛋白含量 |
BCA |
N/A |
单次体积≥50μL |
7 |
检测报告 |
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MicroBCA |
N/A |
单次体积≥300μL |
7 |
检测报告 |
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NanoDrop |
UV280nm |
提供检样消光系数,单次体积≥10μL |
3 |
检测报告 |
| 检测项目 |
检测方法 |
方法描述 | 送检要求 | 检测周期(工作日) | 交付物 |
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蛋白纯度 |
SEC-HPLC |
根据蛋白单体及其他组分尺寸差异分离样品 |
单次检样量≥30μg |
7 |
检测报告 |
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CE-SDS |
UV214检测各组分吸收 |
单次检样量≥150μg |
7 |
检测报告 |
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检测项目 |
检测方法 |
方法描述 |
送检要求 |
检测周期(工作日) |
交付物 |
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Sf9宿主细胞DNA残留 |
qPCR |
N/A |
单次样品体积≥10μL |
7 |
检测报告 |
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杆状病毒DNA残留 |
qPCR |
N/A |
单次样品体积≥10μL |
7 |
检测报告 |
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HEK293宿主细胞DNA残留 |
qPCR |
N/A |
单次样品体积≥10μL |
7 |
检测报告 |
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Sf9宿主细胞蛋白残留 |
ELISA |
N/A |
单次样品体积≥100μL |
7 |
检测报告 |
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杆状病毒蛋白残留(GP64) |
ELISA |
检测GP64蛋白含量 |
单次样品体积≥100μL |
7 |
检测报告 |
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HEK293宿主细胞蛋白残留 |
ELISA |
N/A |
单次样品体积≥100μL |
7 |
检测报告 |
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感染性杆状病毒残留 |
蚀斑法/ TCID50 |
N/A |
蚀斑法单次用量样品体积≥6mL, TCID50单次样品体积≥1.5mL |
30/15 |
检测报告 |
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弹状病毒残留 |
qPCR |
N/A |
细胞:≥1E+6细胞,病毒:单次样品体积≥100μL |
7 |
检测报告 |
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亲和配基残留 |
ELISA |
N/A |
单次样品体积≥100μL,提供配基类型 |
7 |
检测报告 |
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检测项目 |
检测方法 |
方法描述 |
送检要求 |
检测周期(工作日) |
交付物 |
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内毒素 |
凝胶法 |
N/A |
单次样品体积≥12μL |
7 |
检测报告 |
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动态浊度法 |
N/A |
单次样品体积≥12μL |
7 |
检测报告 |
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检测项目 |
检测方法 |
方法描述 |
送检要求 |
检测周期(工作日) |
交付物 |
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外观 |
目视法 |
N/A |
单次样品体积≥200μL |
3 |
检测报告 |
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pH值 |
电位法 |
N/A |
单次样品体积≥200μL |
3 |
检测报告 |
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渗透压 |
冰点法 |
N/A |
单次样品体积≥250μL |
3 |
检测报告 |
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可见异物 |
目视法 |
N/A |
单次样品体积≥200μL |
3 |
检测报告 |
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不溶性微粒 |
光阻法 |
N/A |
单次样品体积≥200μL |
3 |
检测报告 |
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辅料含量(吐温80或其他) |
HPLC |
外标法,CAD检测器 |
单次样品体积≥50μL |
7 |
检测报告 |
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