Adenovirus (AdV)
图1 腺病毒结构(Viral zone网站)
腺病毒(Adenovirus,AdV)是一种无包膜的、直径约为70-90 nm的双链DNA病毒(图1),其基因组大小约为36kb,分为早期(E1A,E1B,E2,E3,E4)、中期(IVa2,pIX)和晚期(L1-L5)转录单元(图2)。腺病毒有50多种血清型,其中的常用血清型为Ad5。腺病毒具有组织嗜性和感染分裂和非分裂细胞的能力,常用的AdV载体分为条件复制型(Conditionally Replicating Adenovirus,CRA; oAd)和复制缺陷型腺病毒(Replication-defective Adenovirus)载体,广泛应用于预防性疫苗、治疗性疫苗以及溶瘤病毒领域。
图2 腺病毒基因组结构(A Handbook of Gene and Cell Therapy)
条件复制型腺病毒载体通过突变或改变E1基因的表达,能使腺病毒在癌细胞中特异性复制。腺病毒E1A CR2或E1B55K通过视网膜母细胞瘤蛋白(Rb) 和p53细胞信号通路干扰宿主细胞的细胞周期,使正常细胞复制进入S期,从而实现大量复制。在E1A CR2或E1B55K缺失后,细胞分裂受抑制,使病毒不能在正常细胞中复制,但可以在Rb和p53调控异常的癌细胞中大量复制。
溶瘤腺病毒(oncolytic adenovirus,oAd)是以腺病毒为基础发展起来的工具病毒,经过人工改造后,可以特异性杀伤肿瘤细胞,具有感染宿主广、安全易生产、可插入较大外源基因等优点而被广泛地研究和应用。
腺病毒作为溶瘤病毒常用的一些改造位点有:E1A-CR2、E1B-55K、E1B-19K等,以及通过肿瘤组织特异性启动子驱动E1A等来增加病毒的靶向性,或者作为载体构建外源免疫相关基因,如IL-12,IFN-γ,GM-CSF等,并结合放疗/化疗的传统疗法或结合单抗或CAR-T等生物疗法,通过多种途径的协同作用对肿瘤细胞进行杀伤。
劲帆医药拥有来源清晰的人血清5型腺病毒(Ad5)毒株和复制缺陷型腺病毒包装系统,可以进行如下改造:1、对腺病毒的结构基因进行改造;2、E1基因插入肿瘤特异性启动子;3、E1A-CR2、E1B-55K、E1B-19K改造;4、携带治疗基因等。为了进一步提高其肿瘤靶向性和安全性,也可按照客户需求进行溶瘤腺病毒定制改造。
名称 |
株系 |
改造方式 |
Adstiladrin |
AdV5 |
复制缺陷型,插入IFNα2b |
H101 |
AdV5 |
E1B-55 KD和E3区基因片段缺失 |
KD01 |
AdV5 |
E1A-CR2缺失,特异性启动子调控E1A |
E10A |
AdV5 |
插入Endostain |
OBP301 |
AdV5 |
E1改造为hTERT-p-E1A-IRES-E1B |
图4 使用我司生产的复制型AD5病毒颗粒(Ad5-GFP)
感染A549细胞120小时
图5 使用我司HEK293细胞生产的复制缺陷型AD5
(AD5-GFP-ΔE1/E3,P1代72小时)