Vaccinia Virus (VACV/VV)
图1 牛痘病毒结构示意图(PMID:15249657)
牛痘病毒(Vaccinia virus,VACV)是体积最大、结构最复杂、有包膜的双链线性DNA病毒,长度约190 kb,可编码约200个基因。病毒粒子呈砖形,大小约为300x240x120 nm。病毒宿主范围广,可插入外源基因容量大;VV病毒在细胞质内复制增殖,不整合到宿主细胞基因组内。
溶瘤痘苗病毒对肿瘤具有天然的趋向性,研究工作者为了进一步提升靶向性和特异性,对其进行了改造,目前主流的改造方式有两种:
(1)缺失痘苗病毒生长因子(vaccinia growth factor, VGF)
(2)缺失胸腺激酶( Thymidine kinase, TK)
VV的生长因子(VGF)基因与表皮生长因子(EGF)同源,可与细胞表面的EGF受体(EGFR)结合,激活Ras通路,进一步启动细胞周期并促进细胞分化,而细胞分化又会促进TK的合成,提高病毒的感染效率。这对于病毒在正常的细胞中扩增十分重要,而在本身可以大量增殖的肿瘤细胞是非必需的。
目前VV毒株株型中Western Reverse株、Lister株、Wyeth株和Copenhagen株具有溶瘤特性,其中Western Reverse株溶瘤特性最强。
劲帆医药可设计生产缺陷型牛痘病毒,即对Western Reverse(WR)株进行特定基因位点敲除,如J2R(TK)、A56R(血凝素)、F14.5等基因,能够使其在正常细胞中不能有效复制且具有肿瘤选择性,同时插入外源基因,如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-6(IL-6)等可以增强免疫反应。为了进一步提高其肿瘤靶向性和安全性,可按照客户需求进行牛痘病毒基因改造。
名称 |
株系 |
改造方式 |
VV-GM-CSF-Lact |
L-IVP |
敲除TK和VGF,插入GM-CSF和Lact |
GL-ONC1 |
GLV-1h68 |
敲除非必需基因,插入Ruc-GFP,β-glucuronidase和β-galactosidase |
hV01 |
惠氏株或WR株 |
敲除TK和VGF,并插入IL-21 |
图3 使用我司改造生产的VV病毒颗粒(产品编号:VV01002)
感染BHK21细胞24小时